设计sgrna时正义链和反义链的区别如下DNA上携带有编码蛋白质氨基酸信息的核苷酸序列的链称为正义链，又称编码链有意义链或正链+链另一条链核苷酸序列与正义链互补，称为反义链与mRNA核苷酸序列相同的那条链U；不要合成pam序列，只要保证待结合的片段 在N20结合区域 后面 紧跟着pam序列即可。

在上一次文章中，我们已经得到了在线工具设计的sgRNA序列，经由简单评估后选择出合适的sgRNA 以上一次文章查到的PTEN knockout cell line 为案例，根据给出的PTEN sgRNA，完善oligo序列，并再Snapgene软件中匹配出来 使用Snapgene；CRISPR设计工具提供了所需的所有寡核苷酸和引物的序列i制备sgRNA结构，ii分析目标修饰效率，iii评估潜在靶外位点的切割值得注意的是，由于表达sgRNA的U6 RNA聚合酶III启动子更倾向于将鸟嘌呤G核苷酸作为其转录本的。

sgrna设计网站哪个好用

sgrna是single guide RNA单导向RNA的缩写在CRISPRCas9系统中sgRNA与gRNA是一个概念CRISPRClustered regularly interspaced short palindromic repeats是原核生物基因组内的一段重复序列，是生命进化历史上，细菌和病毒。

实验流程1设计sgRNA 2构建sgRNACas9载体 3构建sgRNACas9稳转株 4 筛细胞克隆并进行qPCR验证 5 阳性克隆测序，选择敲除纯合细胞株 6 筛选细胞单克隆测序 实验步骤1设计sgRNA 针对小鼠LIF基因座Musmusculus。

打开网站 ，将基因名称，邮箱，第二外显子序列输入到对话框，点击 Agree and submit，等待网站设计成对的 sgRNA 序列一般推荐网站设计，因为网站可以预测脱靶位点数，避免基因脱靶产生当然也可以。